中国汉坦病毒H82O5株G2糖蛋白基因的克隆及在真核细胞中的瞬时表达

从感染病毒乳鼠脑组织提取总RNA，采用RT－PCR和分子克隆技术将扩增到的G2糖蛋白基因插入含CMV启动子的pcDNA3.1/His质粒载体中，通过脂质体介导转染COS－7细胞，用SDS－PAGE、Western-blot及IFIA方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果证明获得正向插入的G2－pcDNA3.1/His重组表达质粒，表达产物的相对分子量为56ku，与理论预期大小一致，并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体起特异反应。表明构建的G2－pcDNA3.1/His重组质粒所表达的蛋白为中国汉坦病毒株特有，能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性，重组质粒可应用于汉坦病毒的DNA疫苗研究。     

甘肃棘豆生物碱部位体内抗肿瘤作用及对免疫功能的影响

目的 研究甘肃棘豆生物碱部位对KM小鼠肝癌H22细胞抑制作用及其对KM小鼠免疫功能的影响。 方法 采用鼠源性肝癌细胞H22移植瘤法,将60只KM小鼠随机分为5组，其中高、中、低剂量组分别给予甘肃棘豆生物碱部位32、16、8 mg/kg体重灌胃，阴性对照组给予生理盐水（NS）20 mL/kg灌胃，5- 氟脲嘧啶（5-FU）组给予5-FU 15 mg/kg体重腹腔注射，每天1次，连续给药10天。检测平均瘤重和抑瘤率,计算脾指数、胸腺指数，MTT法测脾细胞增殖率。 结果 甘肃棘豆生物碱部位高、中、低剂量组对肝癌细胞H22实体移植瘤的抑制率分别为43%、29%、23%；各剂量组小鼠的脾指数和胸腺指数均明显高于阴性对照组，中、高剂量组明显高于5-FU 组（P＜0.05）；各剂量组在24、48、72 h的脾细胞增殖率也明显高于阴性对照组及5-FU 组（P＜0.01）。 结论 甘肃棘豆生物碱部位对KM小鼠肝癌H22移植瘤有抑制作用，并能增强KM小鼠免疫功能。     

淫羊藿苷对家兔阴茎海绵体的舒张作用及机制

目的　观察淫羊藿苷 (ICA)对家兔阴茎海绵体平滑肌的舒张效应及机制。方法　采用离体平滑肌张力记录法。结果　①淫羊藿苷、西地那非 (sildenafil,Sil)、罂粟碱 (Pap)及氨力农 (amrinone ,Amr)均可浓度依赖性地引起舒张效应 ,EC50 分别为 0 2 ,11 2 ,31 6和 5 0 1μmol/L。②NO合酶抑制剂N 硝基左旋精氨酸甲酯 (L NAME ) 5μmol/L可将ICA引起的最大舒张效应由 6 0 %降低到 9% ,而NO前体左旋精氨酸 (L Arginine) 2 0 μmol/L ,可部分恢复ICA的最大舒张效应到 4 0 % (P <0 0 5 )。③ICA (1,10 μmol/L)增强Ach引起的舒张效应 ,最大效应由 6 0 %分别升高到 6 7%和 80 % (P <0 0 5 )。④ICA (3,10 μmol/L)能使高K (2 0～ 12 0mmol/L)去极化引起的最大收缩反应分别降低到 88%和 81% (P <0 0 5 )。⑤在经 1μmol/L阿托品和 5 μmol/L胍乙啶预先处理的标本上 ,电场刺激可以引起海绵体平滑肌频率依赖性的舒张效应。ICA (1、 10 μmol/L)能增强电场刺激引起的舒张效应 ,最大效应由对照水平的4 1%分别升高到 5 9%和 6 3% (P <0 0 5 )。结论　ICA可以直接舒张阴茎海绵体平滑肌 ,其壮阳作用机制与影响NO cGMP信号通路有关。     

钙和鸡冠花黄酮提取物对大鼠废用性骨质疏松的作用

目的探讨钙和鸡冠花黄酮提取物对废用性骨质疏松大鼠的作用,为骨质疏松的防治提供依据.方法选用健康SD大鼠40只,雄性.随机分为5组,第1、2组分别为正常对照和阳性对照,灌胃蒸馏水5 ml/(kg@d),第2～5组制造废用性骨质疏松大鼠模型,第3、4、5组为预防组,分别灌胃等量鸡冠花提取物,碳酸钙,鸡冠花提取物加钙溶液.实验8周后,测骨密度(BMD),股骨CT值,测血清MDA、SOD及24 h尿钙、羟脯氨酸(HOP)、尿肌酐含量等.结果阳性组与正常对照组比较股骨重、灰分重、CT值、血清钙下降,尿钙、尿HOP升高(P＜0.05或0.01),预防组与阳性组比较股骨重、CT值显著增加,碳酸钙组、鸡冠花加钙组灰分重显著增加(P＜0.05).与阳性组比较各预防组血清钙增加,尿钙、尿HOP减少(P＜0.05或＜0.01).鸡冠花组、鸡冠花加钙组与阳性组比较股骨BMD、血清SOD升高,MDA降低,单纯补钙组仅BMD升高(P＜0.05或＜0.01).结论鸡冠花提取物、钙对废用性骨质疏松大鼠骨质代谢均有促进作用,两者合用具有更好的预防效果,能延缓或减轻废用性骨质疏松的发生.     

环孢素A对血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大及c-fos表达的影响

目的 在培养的新生大鼠心肌细胞上观察环孢素A(CsA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大和c-fos表达增加的作用，借以探讨CsA抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥厚的机制。方法 用Bradford比色法测量心肌细胞总蛋白的含量；用Western Blot方法定量测定心肌细胞c-fos蛋白含量。结果 ①AngⅡ可明显增加心肌细胞的蛋白总量，CsA可以浓度依赖地抑制AngⅡ诱导的心肌蛋白含量的增加；②AngⅡ可诱导rfos蛋白表达增加，CsA可浓度依赖性抑制AngⅡ的这一作用。结论 CsA可以抑制AngⅡ诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大，抑制AngⅡ引起的心肌细胞c-fos蛋白表达增加可能是其作用机制之一。     

活血熄风方对局灶性脑缺血大鼠内皮素1和一氧化氮含量的影响

目的观察活血熄风方对局灶性脑缺血模型大鼠血液和脑组织中内皮素1（ET-1）和一氧化氮（NO）含量的影响，探讨其脑保护的作用机制。方法雄性WiStar大鼠40只随机分为5组：假手术组、模型组及活血熄风方高、中、低剂量组，每组8只。采用光化学法建立局灶性脑缺血大鼠模型，造模前7d灌胃给药，活血熄风方高、中、低剂量组分别给予活血熄风方20、10、5g／（kg·d），假手术组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃，造模后24h分别取血及脑组织，放射免疫法测定模型大鼠血浆及脑组织中ET-1含量，分光光度法测定血清及脑组织中N0的含量。结果活血熄风方能降低模型大鼠血浆及脑组织中ET-1含量，降低脑组织中NO含量，升高血清中N0含量，与模型组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论活血熄风方对局灶性脑缺血模型大鼠的保护作用可能与其降低血浆及脑组织中ET-1含量，降低脑组织中N0含量，升高血清N0含量，从而调节ET-1／N0比值有关。     

人前列腺癌细胞PC-3M亚系u-PAR基因与蛋白质表达

为研究与人前列腺癌细胞（PC-3M）侵袭能力相关的靶分子，采用有限稀释法分离单克隆细胞株，并应用单层细胞侵袭等实验鉴定各亚系的体外侵袭能力；借助RT-PCR和免疫组化的方法，分别在转录和翻译水平检测5株侵袭能力不同的PC-3M亚系尿激酶型纤溶酶原激活物受体（u-PAR)的表达。结果显示，高侵袭亚系-u-PAR基因mRNA的表达和蛋白质水平均明显高于低侵袭亚系，提示；PC-3M亚系u-PAR的高表达与其较强的侵袭能力密切相关，而u-PAR可能是抑制高侵袭亚系侵袭效应的一个重要靶分子。     

改良单宁酸-氯化铁法媒染子宫血管的实验研究

目的：光镜下观察大鼠子宫各部位血管构筑。方法：应用单宁酸一氯化铁法(TA—Fe法)灌流固定大鼠，取子宫不同位置做冰冻切片，氯化铁显色，常规脱水、透明、封片，显微摄影。结果：子宫壁出现类似电镜负染色效果，组织结构灰黑色，血管双线条状，分支明显，过管壁切面可见内皮细胞或平滑肌；子宫动脉进入肌层分支并形成一、二级血管网和多支环状动脉，环行动脉或二级血管网发出的微动脉和毛细血管进入粘膜，形成密集的三级毛细血管网。结论：经灌流的子宫标本较长时间保存在媒染固定液内，导致血管外结构也被媒染；子宫壁有三级血管网；每个子宫有多支环状动脉；各段子宫血管构筑不尽相同。     

热应激蛋白70抗体滴度作为二硫化碳接触的生物标记物的研究

目的 :了解二硫化碳接触工人的血清热应激蛋白 70 (HSP 70 )抗体滴度及探讨其作为CS2 接触的分子生物标记物的可行性。方法 :选择某化纤厂 79名工人 ,5 4名为接触组 ,2 5名为对照组。用Westernblot ELISA法对工人血清HSP 70抗体水平进行了检测。采用Logistic回归分析技术 ,分析了HSP 70抗体与CS2 接触之间的关系。结果 :抗体各滴度接触组工人血清HSP 70抗体阳性率明显高于对照组 ,有非常显著意义 (P <0 .0 1)。采用Logistic回归分析控制了因素的混杂作用后 ,这种联系仍然存在。结论 :血清HSP 70抗体滴度可反映CS2 的接触状况。以血清HSP 70抗体滴度作为分子生物学标记物 ,对CS2 接触者进行健康监护有重要意义。     

人乳头瘤病毒16型E7DNA疫苗的构建及其诱导特异性淋巴细胞增殖的研究

目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )E7DNA疫苗诱导机体特异性细胞免疫应答的情况。方法 :采用分子克隆技术 ,构建HPV16野生型E7基因的真核表达重组体 ,将其转化大肠杆菌JM10 9进行筛选 ,通过限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析 ,证明重组质粒中目的基因插入片段及载体DNA大小、方向、插入位点均正确 ,获得HPV16E7DNA疫苗 ,将E7DNA疫苗经皮内注射免疫动物 ,MTT比色法体外检测特异性淋巴细胞增殖反应。结果 :野生型E7DNA疫苗免疫组脾淋巴细胞在体外受到E7蛋白的再次刺激后出现特异性淋巴细胞增殖反应。结论 :野生型E7DNA疫苗可诱导特异性的细胞免疫应答 ,皮内注射HPVDNA疫苗是一种简便有效的免疫接种途径